人細胞ELISA試劑盒的檢測原理主要基于酶聯(lián)免疫吸附測定技術。ELISA是一種廣泛應用于生物醫(yī)學研究和臨床診斷的免疫學檢測方法,用于定量或定性分析液體樣本中的抗原、抗體或蛋白質。
1、包被:首先將針對目標抗原的特異性捕獲抗體固定在微孔板的各個孔內(nèi)壁上,形成一層抗體膜。
2、封閉:為了避免非特異性結合,需要用封閉液填充未被捕獲抗體占據(jù)的位點。
3、加樣:將含有待測抗原的樣本加入到包被有捕獲抗體的孔中,抗原會與捕獲抗體特異性結合。
4、洗滌:去除未結合的物質,通常使用洗滌緩沖液多次清洗。
5、加入檢測抗體:加入針對同一抗原的另一表位的酶標記檢測抗體,該抗體與抗原結合形成“夾心”復合物。
6、再次洗滌:去除未結合的檢測抗體。
7、顯色:加入酶的底物,酶標記的檢測抗體會催化底物發(fā)生化學反應,生成可見的顏色產(chǎn)物。
8、終止反應:根據(jù)實驗設計,可能需要加入終止液來停止顏色的發(fā)展。
9、讀數(shù):使用酶標儀測量每個孔的光密度(OD值),該值與樣本中抗原的濃度成正比。
通過與標準曲線比較,可以計算出樣本中抗原的濃度。ELISA試劑盒通常會提供一系列已知濃度的標準品,以建立標準曲線。
人細胞ELISA試劑盒的優(yōu)點包括靈敏度高、特異性強、操作相對簡單、可同時處理大量樣本等。然而,ELISA結果的準確性和重復性受到多種因素的影響,包括抗體的質量、樣本的處理和儲存條件、實驗操作的標準化等。因此,在進行ELISA實驗時,需要嚴格按照說明書的要求操作,并采取適當?shù)馁|量控制措施。